ESTRAZIONE E CARATTERIZZAZIONE DEL LIPOPOLISACCARIDE DI BARTONELLA QUINTANA. (EXTRACTION AND CHARACTERIZATION OF THE LIPOPOLYSACCHARIDE OF BARTONELLA QUINTANA)

Bartonella quintana has been reported as the cause of trench fever, persistent endocarditis, bacteriaemia and has been isolated with an increasing incidence in clinical specimens from AIDS patients. One of the main pathogenic factors of gramnegative bacteria, including B. quintana, is the lipopolysaccharide (LPS). However, very little information is available on the features of Bartonella LPS. The aim of the present study was to extract, purify and characterise B. quintana LPS. The effect of the LPS under scrutiny was also evaluated on TNFa release by means of the “in vitro” human whole blood model of sepsis. The Oklahoma strain of B. quintana was grown on sheep blood agar, at 37°C, in a moist atmosphere containing 5% carbon dioxide. Cells were harvested and washed in sterile and apyrogenic saline solution and LPS extracted following the procedure of Westphal e Jann (1965), modified by Minnick (1994). The LPS of B. quintana showed the migration pattern of a deep rough chemotype, and the chromogenic limulus amoebocyte lysate test (LAL test) revealed strong reactivity at low concentrations (6.2 pg/ml). Samples of human whole blood stimulated by 1000 ng/ml of B. quintana LPS released 1707±378 pg/ml of TNFa.

Bartonella quintana, conosciuto come agente eziologico della febbre delle trincee, è stato recentemente isolato, con una incidenza crescente, da campioni clinici di pazienti affetti da AIDS, in casi di batteriemie persistenti, ed è associato alla eziologia di endocarditi. Uno tra i principali antigeni e fattori patogenetici dei batteri gram-negativi, inclusa B. quintana, è il lipopolisaccaride (LPS). Sulle caratteristiche del LPS di Bartonella sono disponibili poche informazioni. Scopo del nostro lavoro è stato quello di estrarre, purificare e caratterizzare il LPS di B. quintana e di valutarne l’effetto del LPS in esame sul rilascio di TNF a nel modello sperimentale di sepsi costituito da campioni di sangue umano intero stimolati in vitro. Il ceppo Oklahoma di B. quintana è stato fatto crescere su piastre di agar sangue di montone a 37°C ed incubato in atmosfera umidificata contenente 5% di CO2. Le cellule sono state raccolte e lavate in soluzione fisiologica sterile e apirogena, sottoposte a procedimento di estrazione del LPS secondo la metodica di Westphal e Jann (1965), modificata da Minnick (1994). Dall’analisi su SDS-PAGE risultava che LPS di B. quintana è un chemotipo “deep rough”. ll test cromogenico al lisato di amebociti di limulus (LAL test) indicava una forte reattività anche a concentrazioni molto basse (6.2 pg/ml). Campioni di sangue umano intero stimolati in vitro con 1000 ng/ml di LPS di B. quintana mostravano il rilascio di 1707±378 pg/ml di TNFa.